La microscopia confocale consente di acquisire immagini eliminando l’interferenza delle fluorescenze out-of-focus su preparati vivi o fissati sottoposti a marcature fluorescenti. La produzione dell’immagine confocale si ottiene mediante l’illuminazione del campione con un fascio di luce laser che viene sequenzialmente focalizzato su ogni singolo punto del preparato, sia lungo il piano XY che sull’asse Z. L’acquisizione di più piani confocali del campione analizzato ne permette quindi la successiva ricostruzione tridimensionale mediante la ricostruzione dei singoli segnali rilevati sui punti scansionati effettuata da specifici software. L’evoluzione tecnologica in ambito di microscopia confocale ha consentito lo sviluppo di sistemi sempre più performanti in termini di velocità di scansione, potere risolutivo e sensibilità di detection dei segnali fluorescenti. Nel Laboratorio di Microscopia Confocale, afferente al Dip.to di Medicina e Chirurgia del nostro Ateneo, è stato installato un sistema confocale di ultima generazione fornito dall’azienda Leica Microsystem.

Il sistema confocale Leica STELLARIS 5 è così configurato:

-Microscopio DMi8 a revolver rovesciato dotato di 4 obiettivi (10X/0.3; 20X/0.7; 40X/1.3 oil; 63X/1.4 oil) e stage motorizzato sull’asse XYZ

-Incubatore top stage a CO₂ per studi morfo funzionali in time-lapse su colture cellulari vive

-Laser Bianco e filtro dicroico AOBS programmabile per la separazione simultanea fino a 8 line laser in eccitazione e comprese tra 470 nm e 670 nm. Il modulo Laser è completato da una sorgente a 405 nm per l’eccitazione nell’UV.

-Sistema di rivelazione della fluorescenza è munito di 3 photodetector spettrali “HyDS” indipendenti ad alta efficienza quantica e configurabili per acquisizioni in modalità analogica, conta fotonica o λ-scan.

-Modalità di acquisizione “Lightning” per super risoluzione fino a 120nm sugli assi XY e 320 sull’asse Z

-Doppia licenza del software LasX di ricostruzione 3D, Co-localizzazione, FRAP, FRET per consentire l’analisi di precedenti acquisizioni in modalità offline, su piattaforma hardware indipendente dal sistema confocale.